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Was macht DNA-Sticky-Ends klebrig?

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Wenn Restriktionsenzyme doppelsträngige DNA zackig schneiden, entstehen sogenannte klebrige Enden. Welche Substanz macht die DNA klebrig?


Die klebrigen Enden sind klebrig, weil sie komplementäre Basen haben. Typischerweise verwendete Restriktionsenzyme schneiden die beiden komplementären DNA-Stränge an verschiedenen Stellen, wodurch ein „Überhang“ oder klebrige Enden erzeugt werden:

Diese Überhänge ermöglichen eine perfekte Basenpaarung (C mit G, A mit T), die das Ergebnis von Wasserstoffbrücken ist. So wie Wassermoleküle eine starke Affinität zueinander oder zu anderen Molekülen mit -OH- und -H-Gruppen (z. B. Alkohol) aufweisen, klebt Wasserstoffbrücken zwischen Nukleotiden die Enden zusammen.

Die Prinzipien der Basenpaarung wurden von @MadScientist in "Warum paart sich A mit T und G mit C?"


Was sind klebrige Enden. Es ist keine Substanz angelagert, die die DNA-Enden "klebrig" macht. Was tatsächlich passiert ist, ist ein Überhang von mindestens ein paar Nukleotiden. Stumpfe Enden sind eine andere Schnittart, haben aber keine überstehenden Rückstände.

Warum sind klebrige Enden klebrig? Restriktionsenzyme schneiden diese Enden normalerweise absichtlich ab, so dass am 5'-Ende des Doppelstrangs vier Nukleotide überhängen. Diese sind komplementär zu anderen Überhängen und da sie weniger stabil sind als ein gebundener Doppelstrangbereich und leicht mit komplementären Basen Wasserstoffbrückenbindungen eingehen können, lassen sie sich leichter mit einer Ligase anbinden.

Unten ist ein Bild der Basenpaare, die über H-Bindungen wechselwirken.


Die „Substanz“ sind Wasserstoffbrückenbindungen (H-Brücken), bzw. das Potenzial, sie zu bilden. Jede der ungepaarten A/T-Basen in den klebrigen Enden hat das Potenzial, 2 H-Brücken mit einem komplementären T/A zu bilden, und jede der ungepaarten G/C-Basen hat das Potenzial, 3 H-Brücken mit einem komplementären C . zu bilden /G.

Aus Sicht eines Biophysikers werden H-Brücken oft als die stärksten intermolekularen Wechselwirkungen angesehen. Ich persönlich denke, dass es ein bisschen faul und unphysisch ist, die Dinge so zu sehen, aber die vorherrschende Ansicht auf diesem Gebiet ist, dass H-Brücken die Spezifität bei allen makromolekularen Wechselwirkungen bestimmen (z DNA-Stränge und schlecht bis zufällige DNA-Stränge).


Welche Rolle spielen Sticky Ends in rekombinanter DNA?

Die endet des Strangs sind entweder klebrig oder unverblümt damit sie an anderen befestigt werden können DNA. Erklären Sie, wie die Erstellung von "Klebrige Enden" durch Restriktionsenzyme ist nützlich bei produzieren ein rekombinante DNA Molekül. Klebrige Enden wollen sich verbinden, um Basenpaare und damit ein neues Molekül mit den gleichen zu bilden DNA.

Was sind außerdem die klebrigen Enden eines Plasmids? Die Überhänge, genannt "Klebrige Enden", sind es, die es dem Vektor und dem Insert ermöglichen, aneinander zu binden Klebrige Enden kompatibel sind, dh die überhängenden Basenpaare auf Vektor und Insert sind komplementär, die beiden DNA-Stücke verbinden sich und werden schließlich durch die Ligationsreaktion fusioniert.

Wissen Sie auch, was klebrige Enden tun?

Verwenden von Klebrige Enden hilft Wissenschaftlern, sicherzustellen, dass die DNA-Sequenzen, mit denen sie arbeiten, problemlos zusammengefügt werden können. Sie passen perfekt zusammen, wie Teile eines Puzzles. Das Restriktionsenzym EcoRI macht Klebrige Enden wenn es DNA schneidet.

Was sind klebrige Enden im DNA-Quizlet?

Klebrige Enden sind, wenn die Enzyme versetzte Schnitte in die beiden Stränge machen. Schnitte, die sich nicht direkt gegenüberliegen. Klebrige Enden sind in rDNA am nützlichsten, weil sie verwendet werden können, um zwei verschiedene Teile von . zu verbinden DNA die durch das gleiche Restriktionsenzym geschnitten wurden.


Was ist ein klebriges Ende in der Biologie?

Substantiv Genetik, Biotechnologie. ein einsträngiger Ende von DNA oder RNA mit einer Nukleotidbasensequenz, die zu der eines anderen Strangs komplementär ist, wodurch die Verbindung der beiden Stränge durch Basenpaarung ermöglicht wird: im Labor unter Verwendung von Restriktionsenzymen für gentechnische Zwecke hergestellt.

Zweitens, was ist der Unterschied zwischen stumpfen Enden und klebrigen Enden? Antworten: Unverblümt und Klebrige Enden sind das Ergebnis einer Restriktionsendonuklease-Wirkung auf doppelsträngige DNA. Klebrige Enden &ndash sind gestaffelt endet auf einem DNA-Molekül mit kurzen, einzelsträngigen Überhängen. Stumpfe Enden sind ein gerader Schnitt durch die DNA, die sich ergibt in einem flaches Sockelpaar auf dem endet der DNA.

Wissen Sie auch, wofür klebrige Enden verwendet werden?

Restriktionsenzyme halbieren doppelsträngige DNA. Je nach Restriktionsenzym kann der Schnitt entweder zu a klebrig Ende oder a unverblümt Ende. Klebrige Enden sind beim molekularen Klonen nützlicher, weil sie sicherstellen, dass das menschliche DNA-Fragment in der richtigen Richtung in das Plasmid eingefügt wird.

'klebrig' endet. EIN 'klebrig' Ende entsteht, wenn das Restriktionsenzym schneidet um eins Ende der Sequenz, zwischen zwei Basen auf demselben Strang, dann schneidet im Gegensatz Ende des Komplementärstrangs. Dadurch entstehen zwei endet von DNA, die einige Nukleotide ohne komplementäre Basen aufweisen wird.


'Klebrige Enden

Ein Restriktionsenzym kann DNA an einer spezifischen Nukleotidsequenz schneiden, die normalerweise 4, 6 oder 8 Nukleotide lang ist. Dies kann zu einer symmetrischen Spaltung führen, die zu stumpfen Enden führt, oder zu einer asymmetrischen Spaltung, die "klebrige" Enden verursacht. Ein "klebriges" Ende entsteht, wenn das Restriktionsenzym an einem Ende der Sequenz zwischen zwei Basen desselben Strangs schneidet und dann am gegenüberliegenden Ende des komplementären Strangs schneidet. Dies erzeugt zwei DNA-Enden, die einige Nukleotide ohne komplementäre Basen aufweisen. Ein Restriktionsenzym schneidet nur an einer bestimmten Sequenz und erkennt palindromische Sequenzen, dh Sequenzen, die gleich sind, egal ob sie vorwärts oder rückwärts gelesen werden (zB Wörter wie Hannah und Race car sind Palindrome). Diese „klebrigen“ Enden ermöglichen das Einfügen „fremder“ DNA in das Wirtsgenom. Durch das Schneiden des Plasmids mit dem gleichen Restriktionsenzym werden die gleichen „Sticky Ends“ erzeugt. Zum Beispiel können sich komplementäre Basen des Plasmids mit denen der Wirts-DNA paaren und Wasserstoffbrückenbindungen bilden, die die beiden Stränge miteinander verbinden. Es wird jedoch immer noch Kerben in den Phosphodiester-Bindungen geben, die das starre Phosphat-Rückgrat der DNA bilden. In diesem Szenario kann DNA-Ligase hinzugefügt werden, die die Phosphodiesterbindungen zwischen den rekombinanten Strängen bildet. Die auf dem Plasmid getragenen Gene werden nun in das Genom des Wirts eingebaut, wodurch ein rekombinantes Plasmid entsteht. Das interessierende Gen kann jedoch manchmal in der falschen Orientierung in das Plasmid eingefügt werden.

Diese Schritte werden häufig im Labor verwendet [1] .

…..GAATTC…..
…..CTTAAG…..
Nach der Verwendung von Restriktionsenzymen zum Schneiden an bestimmten Stellen:


Molekularbiologische Techniken

1. Ein Gen mutieren
z.B. um die Funktion einer bestimmten aa oder Domäne zu testen → es sagt Ihnen, ob diese aa oder Domäne für die Funktion des Proteins wichtig ist
--> Sie können auch Tiermodelle für menschliche Krankheiten erstellen, um Behandlungen zu testen

2. Fügen Sie ein Gen hinzu
Z.B. ein Reporterkonstrukt hinzufügen

Sie können dann den Phänotyp des Organismus beobachten, wenn die RNA des Gens zerstört wurde, was darauf hindeutet, was die normale Funktion des Gens ist

Funktioniert nur bei Würmern, Pflanzen und Pilzen

1. Denaturieren doppelsträngiger Nukleotide in einer Quelle

2. Sonde hinzufügen (komplementär zur interessierenden Sequenz und markiert (die Sonde ist radioaktiv oder fluoreszierend))

Sonde komplementär zu mRNA

Moleküle auf Nitrozellulosepapier übertragen

Schneiden Sie genomische DNA mit Restriktionsenzym (Chromosomen sind viel zu groß, um durch das Gel zu passen)

Selbst nach dem Verdau mit einem Restriktionsenzym ist die genomische DNA nur ein Abstrich (zu viele Banden unterschiedlicher Größe)

mRNA aus verschiedenen Zell-/Gewebetypen verwenden

Sonde = DNA komplementär zu mRNA

1. Schneiden Sie genomische DNA mit Restriktionsenzym (um eine überschaubare Größe zu erreichen) → aber wo sie schneiden hat keine Beziehung zu den Anfängen oder Enden der Gene

2. DNA-Fragmente in ein Plasmid ligieren

3. Verwandeln Sie die Plasmide in Bakterien

Bakterienkolonien auf einer Petrischale züchten → jede Kolonie enthält ein anderes Stück DNA aus dem Genom

Legen Sie Nitrozellulosepapier auf die Petrischale → einige der Kolonien kleben auf dem Papier in dem gleichen Muster wie auf der Petrischale

Bakterien lysieren und DNA denaturieren

Reverse Transkriptase: synthetisiert DNA unter Verwendung einer RNA-Vorlage

Verwenden Sie einen Poly(T)-Primer: TTTTTTTTTTT

---> dsDNA = cDNA, komplementär zur mRNA, mit der wir angefangen haben

2. Gene können fragmentiert werden, sodass Teile der Gene oft über verschiedene Klone in der Bibliothek verteilt sind

1. enthält nur Codierungssequenzen
---> Kodierungssequenzen leichter zu studieren

Nachteile von cDNA: Sie können keine regulatorischen Sequenzen untersuchen (Transkriptionsfaktor-Bindungsstellen sind nicht Teil der kodierenden Region und daher nicht enthalten)

Die Kopiennummer ist proportional zum Transkriptionsniveau (eine größere Anzahl von Kopien deutet darauf hin, dass das Gen in diesem Gewebe mehr transkribiert wird)

---> ein Gen, das in geringen Mengen exprimiert wird, ist in der cDNA-Bibliothek schwer zu finden (es wird nur sehr wenige Klone davon geben)

Aus dem Lehrbuch:
Genomische Klone stellen eine zufällige Stichprobe aller im Genom eines Organismus gefundenen DNA-Sequenzen dar und enthalten mit sehr seltenen Ausnahmen die gleichen Sequenzen, unabhängig davon, aus welchem ​​Zelltyp die DNA stammt. Außerdem enthalten genomische Klone von Eukaryoten große Mengen nichtkodierender DNA, repetitive DNA-Sequenzen, Introns, regulatorische DNA und Spacer-DNA-Sequenzen, die für Proteine ​​kodieren, machen nur wenige Prozent der Bibliothek aus.

Im Gegensatz, cDNA-Klone enthalten überwiegend proteinkodierende Sequenzen und nur solche für Gene, die in den Zellen, aus denen die cDNA hergestellt wurde, in mRNA transkribiert wurden. Da verschiedene Zelltypen unterschiedliche Sätze von mRNA-Molekülen produzieren, ergibt jede eine andere cDNA-Bibliothek. Darüber hinaus ändern sich Muster der Genexpression während der Entwicklung, sodass Zellen in verschiedenen Stadien ihrer Entwicklung auch unterschiedliche cDNA-Bibliotheken ergeben.


Was macht DNA-Sticky-Ends klebrig? - Biologie

DNA Ende oder Klebriges Ende bezieht sich auf die Eigenschaften der Ende eines DNA-Moleküls oder eines rekombinanten DNA-Moleküls. Das Konzept ist in der Molekularbiologie wichtig, insbesondere beim Klonen oder beim Subklonieren von Insert-DNA in Vektor-DNA. Alle Begriffe können auch als Referenz verwendet werden.
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. Basenpaarung mit jedem DNA-Molekül, das die komplementären klebrig Ende. . Dieses wird durch das Restriktionsenzym EcoRI geschnitten und produziert klebrig endet. .
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Information über klebrig Ende im kostenlosen Online-Englisch-Wörterbuch und . klebrig Ende - ein Ende von DNA, in der ein Strang der Doppelhelix einige wenige verlängert.
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Information über klebrig endet im kostenlosen Online-Englisch. klebrig Ende - ein Ende DNA, in der ein Strang der Doppelhelix einige wenige verlängert.
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klebrig Ende ein Ende DNA, bei der ein Strang der Doppelhelix einige Einheiten über die . Was ist der klebrig Ende des weiblichen Teils einer Blüte.
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Hinweis: Klicken Sie unten auf eine Wortbedeutung, um die Verbindungen und verwandte Wörter anzuzeigen. Das Nomen klebrig Ende hat eine Bedeutung: Bedeutung #1 : an Ende der DNA, in der
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Klebrig endet. Klebrig endet . ich) erzeugen endet mit kurzen einzelsträngigen Sequenzen. Eine solche endet werden genannt klebrig endet. Verwandt. Unverblümt endet Überhang. Sonstiges .
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MySpace-Profil für Friedrich Lewe. Finden Sie Freunde, teilen Sie Fotos, bleiben Sie mit Klassenkameraden in Kontakt und lernen Sie neue Leute auf MySpace kennen.
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Regie: Martin Gooch. Mit Jason Attar, Mark Felgate, Charlie Lemmer. . Diskutieren Sie diesen Film mit anderen Benutzern im IMDb-Forum für Eddie Klebrig Ende (2003) .
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Cola, Pepsi und andere Marken werden nicht mehr aus dem Geschäft gezogen. Die Soda-Giganten Coca Cola (KO), Pepsico (PEP) und Cadbury Schweppes (CSG) verneigten sich.
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Klebrig Endet werden A. durch die Wirkung von DNA-Ligase produziert. B. durch PCR hergestellt. C. immer lange Sequenzen eines einzelnen Nukleotids. D. von mRNA verwendet, um an Ribosomen zu binden. .
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Wissenschaftler der Duke University haben kürzlich eine neue Methode zum Zusammenbau großer, kostengünstiger DNA-Nanostrukturen demonstriert, teilweise durch die Wiederverwendung der "klebrig-endet," das .
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Der erste Typ, der "Generika" klebrig-Ende, bindet mit nur einer Helix anstelle der normalen zwei. . Typ, der "spezifische" klebrig-Ende, bietet eine stärkere .
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HotChalk (www.hotchalk.com) ist ein kostenloses, benutzerfreundliches webbasiertes Lernprogramm. lege ein Ende zumindest einen Teil deines Papierangriffs, indem du klebrig notiert eine Sache.
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Sehen Sie sich Kanal:UKTV-Videos aus dem gesamten Internet an. Für die beste Art von klebrig Ende, probieren Sie Ed Baines' verführerischen Toffee-Pudding mit .
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Definition von Klebrig Ende . A B C D E F G H I J K L M N O P Q R S T U V W X Y Z. Suche nach Klebrig Ende auch in diesen anderen Datenbanken. Definition von Klebrig Ende : .
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Was macht DNA-Sticky-Ends klebrig? - Biologie

DNA Ende oder klebrig Ende bezieht sich auf . Längere Überhänge werden als kohäsiv bezeichnet endet oder klebrig endet. . Zum Beispiel diese beiden " klebrig" endet sind kompatibel: .
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Diese nennt man "klebrig endet", weil sie mit jeder DNA Basenpaare bilden können. Diese wird durch das Restriktionsenzym EcoRI geschnitten und produziert klebrig endet. .
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Information über klebrig Ende im kostenlosen Online-Englisch-Wörterbuch und . klebrig Ende - ein Ende von DNA, in der ein Strang der Doppelhelix einige wenige verlängert.
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Information über klebrig endet im kostenlosen Online-Englisch. klebrig Ende - ein Ende DNA, in der ein Strang der Doppelhelix einige wenige verlängert.
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DNA Ende Dieser Artikel stützt sich weitgehend oder vollständig auf eine einzige Quelle. . Zum Beispiel diese beiden "klebrig" endet sind kompatibel: .
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Klebrig endet. Klebrig endet . ich) erzeugen endet mit kurzen einzelsträngigen Sequenzen. Eine solche endet werden genannt klebrig endet. Verwandt. Unverblümt endet Überhang. Sonstiges .
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Wissenschaftler der Duke University haben kürzlich eine neue Methode zum Zusammenbau großer, kostengünstiger DNA-Nanostrukturen demonstriert, teilweise durch die Wiederverwendung der "klebrig-endet," das .
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"Klebrig-endet sind einzelsträngige DNA-Stücke, die hybridisieren oder eine . Pistole und Dwyer benutzten alle spezifischen klebrig-endet um zwei 4 x 4 Gitter zu verbinden. .
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EIN Klebrig Ende In Quantum (SPOILER) Von Garth Franklin Montag, 6. Oktober 2008 00:06 . das von Jill Masterson, der blonden Schönheit, die ihren Arbeitgeber verrät und endet .
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Klebrig endet sind endet auf einem oder mehreren DNA-Molekülen mit kurzen, überhängenden, . Sie kommen zu a klebrig Ende. Zusammenhalt. Nachts. kostenlos. Molekül. DNA.
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Nennen Sie die Bindungen, die gebildet werden, wenn klebrig endet Glühen und solche, die sich stumpf bilden endet glühen.
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Daraus ergibt sich beides endet mit einem einsträngigen Bereich namens klebrig endet. . dieser Raum, in dem das neue DNA-Stück hinzugefügt wird, das an die klebrig endet. .
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Das Leben ist voll von klebrig endet. Kontinuierlich klebrig Situation wartet auf mich, aber ich habe keine Angst! . sie hatte gekämpft bis zum Ende, sie ist in der Tat eine Kämpferin und .
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Die Schwänze heißen "klebrig-endet" weil sie sich miteinander kombinieren lassen. . Zwei kostenlose klebrig endet passt natürlich zusammen wie Legosteine. .
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Hybridisierung zwischen klebrig endet verbindet zwei DNA-Moleküle miteinander. . Diese Motive beim Tragen klebrig endet, wurden gut selbst zusammengebaut.
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Gesucht wird nach "Bobby Davro", dessen Figur in der Seifenoper EastEnders . 0 Antworten // Wellards Klebrig Ende. Fügen Sie Ihre Antwort hinzu.
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Um zu verwenden klebrig endet zum Verbinden rekombinanter DNA-Moleküle ist es . Klebrig endet ergibt sich immer dann, wenn der Schnitt nicht genau in der Mitte der Sequenz liegt. .
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Verwendung von Bakterien

Eine gängige Methode in der Gentechnik besteht darin, ein Gen für ein nützliches Produkt (z. B. Insulin) zu finden und einen Mikroorganismus dazu zu bringen, es zu produzieren.

Dies geschieht mit a Vektor die Dinge zwischen den Arten tragen. Bei der Verwendung von Bakterien ist der Vektor der Plasmid Dies ist ein DNA-Kreis, der im bakteriellen Zytoplasma gefunden wird. Es kann leicht geöffnet und ein DNA-Fragment eingefügt werden.

Der Vektor kann ermutigt werden, in die Zelle einzutreten, indem Hitzeschock wo die Temperatur schnell von 0 auf 40°C erhöht wird oder Sie auch verwenden könnten Elektroporation wo eine Hochspannung verwendet wird, um die Zellmembran zu zerstören.

Die obigen Schritte zeigen, wie das Gen zu einem Plasmid hinzugefügt wird. Das Plasmid hat bereits ein Gen für Antibiotika Resistenz gegenüber Tetracyclin und Ampicillin, wie durch die schwarzen Bereiche gezeigt. Dann wird eine Restriktionsendonuklease eingeführt, die das Gen zwischen dem Tetracyclin-Resistenzgen schneidet, und ein Insulingen wird hinzugefügt.

Am unteren Rand des Diagramms sind die möglichen Ergebnisse dieser Situation dargestellt. Plasmid A zeigt, dass es keine Änderung gegeben hat, weil das Plasmid wieder zusammengefügt wurde, nachdem es aber geschnitten wurde oder nie geschnitten wurde. Plasmid B zeigt, dass das Insulin-Gen in die klebrigen Enden aufgenommen wurde und jetzt stört das Tetra-Resistenzgen. Plasmid C zeigt, dass sich das Insulin-Gen in ein eigenes kleines Plasmid eingerollt hat.

Es gibt eine andere Situation des Plasmids, die der von B entspricht, aber anstelle eines Insulingens, das das Tetra-Resistenzgen stört, handelt es sich um ein anderes Genfragment (an dem wir nicht interessiert sind. Zur Vereinfachung der Erklärung wurde dies jedoch weggelassen.

In Schritt 3 werden die verschiedenen Bakterien mit diesen Plasmiden kultiviert. Verwenden eines Prozesses namens Replikatbeschichtung wobei ein Stück Samt auf die Bakterien der Masterplatte gelegt und dann zu einem Kopieren auf den nächsten. Die Kulturen werden als nächstes auf einer Platte mit Ampicillin gezüchtet, dies tötet die Bakterien ohne die Resistenz gegen das Gen, d.h. Bakterien mit Plasmid C (Ring auf Insulin) und Bakterien ohne unser Plasmid.

Was auf der Amp-Platte zurückbleibt, sind Bakterien mit den Plasmiden A und B (siehe Diagramm über diesem). Diese werden nun auf eine finale Platte mit Tetracyclin . Dadurch werden Bakterien, die Plasmid B enthalten, abgetötet, da Tetra. Resistenzgen wurde gestört durch das Insulin-Gen. Jetzt müssen wir nur noch die Bakterienkolonien vergleichen, um zu sehen, wo sich die insulinhaltigen Bakterien befinden.


Kohäsive (klebrige) Enden und ihre Bedeutung in der Gentechnik, Paul Berg

Interviewpartner: Paul Berg. Kohäsive (klebrige) Enden und ihre Bedeutung in der Gentechnik.

Kohäsives Ende bedeutet in diesem speziellen Kontext, dass, wenn man zwei DNAs nimmt, aus deren Enden Einzelstränge herausragen, und wenn diese Einzelstränge nach den gleichen Regeln miteinander paaren können, wie DNA-Stränge zusammengehalten werden, dann könnten diese beiden Moleküle kommen zusammen. Und was Janet zeigte, war, dass, wenn zwei DNAs mit diesem speziellen Enzym namens Eco R-1 geschnitten würden, sie verbunden und miteinander verschmolzen werden konnten, um rekombinante DNAs zu erzeugen. Und das war eine enorm wichtige Entdeckung, weil die komplizierten Verfahren, die wir entwickelt hatten, um zwei Moleküle zusammenzubringen, überflüssig wurden.

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Verschiedene Enzyme können das gleiche klebrige Ende geben

Restriktionsstellen befinden sich im gesamten Genom von Organismen, sind jedoch nicht gleichmäßig verteilt. In Plasmiden können sie so konstruiert werden, dass sie direkt nebeneinander liegen. Wissenschaftler, die ein Fragment menschlicher DNA aus dem menschlichen Genom herausschneiden wollen, müssen Restriktionsstellen finden, die sich vor und hinter der Region des Fragments befinden. Abgesehen davon, dass ein DNA-Fragment in die richtige Richtung eingefügt wird, können verschiedene Sticky-End-Enzyme dasselbe Sticky-Ende erzeugen, obwohl sie unterschiedliche Restriktionssequenzen erkennen. BamHI, BglII und Sau3A haben beispielsweise unterschiedliche Erkennungssequenzen, produzieren aber das gleiche klebrige GATC-Ende. Dies erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass es Restriktionsstellen für klebrige Enden gibt, die Ihr interessierendes menschliches Gen flankieren.